Värjäysreagenssit

Muista merkitä täplät lyijykynällä TLC-levylle, kun käytät ei-pysyvää visualisointimenetelmää.

Värjääminen jodilla I₂

Jodi värjää useimmat yhdisteet, joilla on jokin funktionaalinen ryhmä, joten se on erityisen hyvä tyydyttymättömien yhdisteiden värjäämiseen. Tämä menetelmä ei jätä pysyvää väriä, sillä jodi haihtuu muutamassa minuutissa. Haihtumista voidaan nopeuttaa varovaisella kuumennuksella. Jodia käytetään usein sen jälkeen, kun TLC-levyä on katsottu UV:n alla ja ennen kuin se värjätään pysyvillä värjäysreagensseilla. Jodi saattaa häiritä joitakin värjäysreagensseja, joten sitä ei kannata käyttää jokaisella levyllä.

Valmistus: Pane muutama jodikide ja 2 teelusikallista hiekkaa lasiastiaan, jossa on tiivis kansi.
Käyttö: Laita TLC-levy hiekka-jodi astiaan ja pyöritä astiaa ympäri muutaman kerran. Täplät värjäytyvät ruskean eri sävyisiksi. Kun olet merkinnyt värjäytyneet täplät, jätä levy vetokaappiin haihtumaan tai lämmitä levyllä kunnes jodin ruskea väri katoaa.

Huom! Jodihöyryt ovat myrkyllisiä. Muista pitää jodiastia huolellisesti suljettuna ja työskentele aina vetokaapissa, kun käytät jodia.

Värjääminen liuoksilla

Värjäysliuoksia käytetään UV:n (ja jodin) jälkeen, koska ne ovat pysyviä. Värjäytyminen on kemiallisesti irreversiibeliä ja visualisointi muilla keinoilla on mahdotonta liuosten jälkeen. Värit eivät kuitenkaan ole pysyviä, vaan häviävät ajan kuluessa. Heti värjäyksen jälkeen levyistä tulee piirtää kopio 1:1 laboratoriopäiväkirjaan.

Huom! Jos levyllä ei näy jotakin, se ei välttämättä tarkoita, ettei sitä olisi levyllä. Väri on seurausta TLC-levyllä olevien komponenttien ja värjäysreagenssin välisestä kemiallisesta reaktiosta, joten värjäys tapahtuu vain, jos reaktio tapahtuu.

Jos reaktiossa on kemiallisesti hyvin erilaisia yhdisteitä, täytyy ajaa kaksi tai useampia TLC-levyjä yhtä aikaa ja värjätä ne eri reagensseilla.

Värjäysreagenssit säilyvät rajallisen ajan. Yleensä kuukaudesta muutamaan kuukauteen. Värjäysreagensseja säilytetään aina tummissa lasiastioissa, joissa on tiiviit kannet. Kun reagenssi vaihdetaan, astia pestään huolellisesti ja merkitään astiaan päivämäärä.

Käyttö: Anna liuottimen (eluentin tai I₂) haihtua levyltä. Pitele levyä yläkulmasta pinseteillä, kasta levy kokonaan väriin ja nosta se nopeasti pois. Pyyhi levyn reuna paperiin ylimääräisen värin poistamiseksi ennen kuin kuumennat sitä levyllä. Älä kuitenkaan ylikuumenna TLC-levyä!

Eri täplät reagoivat eri nopeuksilla värjäysreagenssien kanssa riippuen niiden kemiallisesta luonteesta.

Yleisiä TLC-värjäysreagensseja

Seuraavat värjäysreagenssit vaativat kuumennusta.

Fosfomolybdeenihappo (Phosphomolybdic acid, PMA):

Hyvä yleinen reagenssi hapettuville aineille, erityisesti ei-haihtuville alkoholeille. Sinivihreät täplät.
Valmistus: 5 g fosfomolybdeenihappoa liuotetaan 100 ml etanolia.
Säilytys: Tummassa lasiastiassa ja kansi pidetään tiukasti suljettuna. Säilyy alle kuukauden.

Anisaldehydi:

Hyvä yleisreagenssi, joka antaa erilaisia värejä.
Valmistus: 7 ml anisaldehydiä liotetaan 250 ml etanolia ja lisätään varovasti 5 ml väkevää rikkihappoa ja 3 ml jääetikkaa (CH₃COOH).
Säilytys: Tummassa lasiastiassa. Varastoliuos säilyy ainoastaan kylmässä.

H₂SO₄

Hyvä yleisreagenssi.
Valmistus: 5 ml konsentroitua rikkihappoa 100 ml etanolia.
Säilytys: Tiiviisti suljettuna tummassa lasiastiassa.

Tyydyttymättömät yhdisteet: Permanganaatti

Useimmat alkeenit ja alkyynit värjäytyvät nopeasti (keltainen täplä). Aldehydit ja alkoholit värjäytyvät myös keltaisiksi, mutta ketonit ja monet esterit saadaan näkyviin vasta kuumennuksen jälkeen tai muutaman minuutin kuluttua.
Valmistus: 3 g KMnO₄, 20 g K₂CO₃ ja 5 ml 1M NaOH laimennetaan 300 ml vettä.
Reaktio:

Erikoisvärjäysreagenssit:

Nämä värit eivät yleensä vaadi lämmittämistä. Varovainen lämmitys antaa kuitenkin usein paremman tuloksen.

Aldehydit ja ketonit: 2,4-dinitrofenyylihydratsiini (DNP)

VAROITUS: 2,4-dinitrofenyylihydratsiini on myrkyllistä. Käsittele reagenssia erityisen huolellisesti. Jätä reagenssilla värjätyt levyt vetokaappiin omaan astiaansa ja piirrä levy työpäiväkirjaasi värjäyspisteen luona.

Oranssit täplät. Hyvin nopea reaktio aldehydien kanssa, jotkut estyneemmät ketonit voivat reagoida hitaammin.
Valmistus: 1 g DNP:ta liuotetaan etanolin (100 ml) ja veden seokseen (40 ml), ja lisätään 30 ml väkevää rikkihappoa.
Reaktio:

Amiinit: Ninhydriinireagenssi

Primääriset amiinit värjäytyvät kellanoransseiksi (tai keltaiseksi) ja sekundääriset amiinit värjäytyvät punaisiksi melkein heti.
Valmistus: 2.5 g ninhydriiniä liuotetaan 250 ml etanolia ja lisätään 0,5 ml jääetikkahappoa.
Reaktio: